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公司动态
ELISA试剂盒操作步骤复杂
发布时间:2015-11-23        浏览次数:429        返回列表
影响反应因素较多,特别是固相载体的包被难达到各个体之间的一致,因此在定量测定中,每批测试均须用一系列不同浓度的参考标准品在相同的条件下制作标准曲线。以下就是远慕生物的详解:

试剂盒 (4)

测 定大分子量物质的夹心法ELISA试剂盒,标准曲线的范围一般较宽,曲线点的吸光度可接近2.0,绘制时常用半对数纸,以检测物的浓度为横坐标,以吸 光度为纵坐标,将各浓度的值逐点连接,所得曲线一般呈S形,其头、尾部曲线趋于平坦,中央较呈直线的部分是理想的检测区域。在实验条件(包括试剂)较难 保证恒定的情况下,这种判断法较为合适。

在得出标本(S)和阴性对照(N)的A值后,计算S/N值。也有写作P/N的,这里的P不代表阳 性ELISA试剂盒(positive),而是病人(patient)的缩写,不应误解。为避免混淆,更宜用S/N表示。在早期的间接法ELISA中,有 些作者定出S/N为阳性标准,现多为各种测定所沿用。实际上每一测定系统应该用实验求出各自的S/N的阈值。更应注意的是,N所代表的阴性对照是不含受检 物质的人血清。

有的ELISA试剂盒中所设阴性对照为不含蛋白质或蛋白质含量较底的缓冲液,以致反应后产生的本底可能较正常人血清的本底 低得多。定性测定的结果判断是对受检标本中是否含有待测抗原或抗 出"有"或"无"的简单回答,分别用"阳性"、"阴性"表示。"阳性"表示该标本在该测定系统中有反应。"阴性"则为无反应。用定性判断法也可得到半定量 结果,即用滴度来表示反应的强度,其实质仍是一个定性试验。在这种半定量测定中,将标本作一系列稀释后进行试验,呈阳性反应的稀释度即为滴度。根据滴 度的高低,可以判断标本反应性的强弱,这比观察不稀释标本呈色的深浅判断为强阳性、弱阳性更具定量意义。 在间接法和夹心法ELISA试剂盒中,阳性孔呈色深于阴性孔。在竞争法ELISA试剂盒中则相反,阴性孔呈色深于阳性孔。两类反应的结果判断方法不同,分 述于下。